犬瘟热核衣壳蛋白原核表达及蛋白纯化

作     者：周瑶 李连燕 吴磊 徐闰 刘灵康 韦茏芹 王鹏霞 韦金鱼 邢青波 徐小明 郑喜邦 ZHOU Yao;LI Lian-yan;WU Lei;XU Run;LIU Ling-kang;WEI Long-qin;WANG Peng-xia;WEI Jin-yu;XING Qing-bo;XU Xiao-ming;ZHENG Xi-bang

作者机构：广西大学动物科技学院广西南宁530004 广西玉林市动物卫生监督所 

基　　金：国家自然科学基金项目(31660653) 广西科技计划重点研发项目(桂科AB16380098) 

出 版 物：《畜牧兽医杂志》 (Journal of Animal Science and Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第37卷第3期

页      码：1-5页

摘      要：犬瘟热病毒(CDV)是一种单链RNA病毒,作为转录因子合成蛋白,共编码六个结构蛋白,其中核衣壳蛋白N(CDV-N)是保守性较强的免疫原性蛋白,在病毒感染时能引起强烈的抗体反应,对于CDV的诊断具有非常重要的价值。本研究的目的是构建CDV-N蛋白原核表达载体,利用原核表达技术纯化CDV-N蛋白。利用DNAStar软件预测CDV-N蛋白抗原表位,选择588bp截短体用于原核表达。设计引物,以本实验室保存的pMD18-T-CDV质粒为模板,PCR扩增CDV-N588片段,并将其TA克隆至pMD18-T载体。通过酶切鉴定和DNA测序,从pMD18-T-CDV-N588质粒上切取CDV-N588片段,再将其亚克隆至pET30a原核表达载体,构建重组质粒pET30a-CDV-N588。该重组质粒转化大肠杆菌BL21,ITPG在37℃诱导表达His-CDV-N588融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western Blotting加以验证。相同条件下大量增菌诱导,Ni-NTA琼脂糖珠在变性条件下分离纯化His-CDV-N588融合蛋白,再次用SDS-PAGE和Western Blotting进行验证。结果表明:pET30a-CDV-N在大肠杆菌BL21中得到高效表达;SDS-PAGE和Western Blotting检测证实,我们成功纯化了His-CDV-N588融合蛋白。本研究为制备CDV-N588蛋白单克隆抗体和研制胶体金诊断试纸条奠定了基础。

主 题 词：犬瘟热病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-6704.2018.03.001

馆 藏 号：203289919...