一种基于CP530R序列非洲猪瘟病毒TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法的建立

作     者：王建华 董志珍 赵丹 王玉玲 肖妍 张俊哲 陈小金 王乃福 陈本龙 赵祥平 

作者机构：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心天津300456 

基　　金：天津市科技支撑计划项目(13ZCZDNCO1300) 天津市滨海新区惠民项目(2013-BK15H013) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第2期

页      码：22-26页

摘      要：为了建立一种快速、敏感和特异地检测非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）的方法，试验根据ASFV CP530R基因序列设计1对特异性引物和探针，通过优化反应条件，建立了一种检测ASFV的TaqMan—MGB探针实时荧光PCR方法，并对该方法进行了特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验评价。结果表明：该方法仅对ASFV发生特异性扩增反应，不与伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）、经典猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪流感病毒（SIV）发生交叉反应，具有良好的特异性。用该方法检测质粒标准对照（PCR2．1-ASFV—CP530R）的线性范围为6．1×10^2-6．1×10^9copies／μL，标准曲线方程为Y=-3．449x＋38．10，相关系数（R^2）为0．999，最低可检测到61个拷贝的质粒标准对照分子；对5个不同浓度（6．1×10^3-6．1×10^7copies／μL）的质粒标准对照进行双份样品的4次重复检测，每个浓度质粒标准对照的D值变异系数均小于2．0％，具有良好的重现性；用该方法对126份进口猪的血液样品和38份猪肉样品进行ASFV检测，结果均为阴性。说明本方法可用于活猪临床样品和生猪样品中ASFV的检测。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 CP530R序列 TaqMan-MGB探针 实时荧光PCR 方法 建立 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.0187

馆 藏 号：203289940...