小鼠pLCK-CD69-IRES-EGFP表达载体构建及CD69转基因小鼠的建立

作     者：王静 胡燕 谭笔琴 王佳佳 赵梦婷 翁勤洁 朱狄峰 汪慧英 WANG Jing;HU Yan;TAN Bi-qin;WANG Jia-jia;ZHAO Meng-ting;WENG Qin-jie;ZHU Di-feng;WANG Hui-ying

作者机构：浙江大学药学院浙江省抗肿瘤药物临床前研究重点实验室浙江杭州310058 浙江大学药学院浙江大学药物安全评价研究中心浙江杭州310058 浙江大学医学院附属第二医院过敏科浙江杭州310009 

基　　金：浙江省实验动物科技项目(2011C37073) 国家科技支撑计划(2013BAD19B05) 国家自然科学基金(81202606) 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2015年第44卷第5期

页      码：511-516页

摘      要：目的：构建携小鼠细胞表面活化蛋白CD69和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）在细胞内核糖体切入位点（IRES）的表达载体pLCK—CD69-IRES—EGFP，并基于此创建CD69转基因小鼠。方法：首先通过小鼠肺组织提取RNA，逆转录成为cDNA，经过PubMed搜索设计PCR引物，PCR法扩增mCD69片断，接着将该DNA片段经测序验证后接入pInsulater—LCK—IRES—EGFP质粒，构建pLCK—CD69-IRES—EGFP转基因载体；再将其转染到293T细胞中，通过荧光显微镜技术确定其在293T细胞中的表达状况；最后将载体显微注射入受精卵并移植入假孕母小鼠，出生小鼠取尾经PCR鉴定获得阳性首建鼠，并通过荧光显微镜和流式细胞术确定淋巴细胞上CD69的表达。结果：经酶切、DNA测序鉴定证实pLCK—CD69-IRES—EGFP表达载体构建成功；荧光倒置显微镜检查证实其在转染的293T细胞内的蛋白表达；小鼠取尾PCR鉴定明确CD69转基因小鼠创建成功；CD69转基因小鼠有外周血淋巴细胞的减少及静息状态下CD69的表达。结论：成功构建pLCK-CD69-IRES—EGFP表达载体及制备CD69转基因小鼠，为CD69在炎症性疾病中作用的整体模型研究奠定了基础。

主 题 词：抗原 核糖体 绿色荧光蛋白质类/代谢 质粒 转染 小鼠,转基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3785/j.issn.1008-9292.2015.09.07

馆 藏 号：203289961...