金黄色葡萄球菌IsdB表位蛋白与HBc蛋白融合表达

作     者：白靓 成岩 徐芳菲 刘燕 张树军 曹瑞珍 BAI Liang;CHENG Yan;XU Fangfei;LIU Yan;ZHANG Shujun;CAO Ruizhen

作者机构：内蒙古民族大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室内蒙古通辽028000 内蒙古民族大学医学院病原生物学与免疫学教研室内蒙古通辽028000 吉林省集安益盛药业股份有限公司吉林集安134200 

基　　金：内蒙古自治区科技厅自然科学基金资助课题(2011BS0401) 内蒙古民族大学博士科研启动基金资助课题(BS280) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2015年第41卷第2期

页      码：269-274页

摘      要：目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入*** BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB50-285+adjuvant组、HBcIsdB50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0g·L-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P0.05);且其与HBc-IsdB50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P>0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P<0.01),HBc-IsdB50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P<0.05)。结论:HBc-IsdB50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 乙型肝炎病毒核心蛋白 铁调节表面决定因子B 表位 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.20150212

馆 藏 号：203293904...