siRNA对HeLa细胞膀胱癌相关蛋白基因表达的抑制作用

作     者：左泽华 张力 伍欣星 赵旻 ZUO Zehua;ZHANG Li;WU Xinxing;ZHAO Min

作者机构：武汉大学医学院病毒学研究所湖北武汉430071 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81072123) 高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(编号:20070486055) 湖北省自然科学基金资助项目(编号:131292) 

出 版 物：《武汉大学学报（医学版）》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2011年第32卷第6期

页      码：709-712,732页

摘      要：目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建BLCAP基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对BLCAP基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重组体经脂质体转染细胞,通过荧光显微镜观察细胞内质粒表达情况,并采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后BLCAP基因mRNA及蛋白的表达,验证RNAi作用的特异性及时效性。结果:同对照组相比,各BLCAP siRNA均可引起靶基因表达水平的显著性下降(P<0.05),尤以pRNA-U6.1-B2-siRNA的作用效果最强(P<0.01);而空脂质体组及阴性对照siRNA组的靶基因表达水平则无明显变化。将pRNA-U6.1-B2-siRNA转染细胞后12,24,48h均可观察到靶基因表达的显著性降低(P<0.05),其中在24h后达到最强抑制效果。结论:不同序列的siRNA,对靶基因的干扰效率不同;BLCAP基因siR-NA能够特异、高效性的抑制靶基因的表达;抑制作用在24h达到高峰,并可维持到转染后48h。试验结果为进一步研究采用RNA干扰技术进行宫颈癌的生物治疗奠定了基础。

主 题 词：宫颈癌 siRNA BLCAP基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.14188/j.1671-8852.2011.06.021

馆 藏 号：203294533...