荧光定量PCR方法快速检测原料乳中的大肠杆菌

作     者：周微 张伟钦 付宇 贡汉生 孟祥晨 ZHOU Wei;ZHANG Wei-qin;FU Yu;GONG Han-sheng;MENG Xiang-chen

作者机构：东北农业大学乳品科学教育部重点实验室/食品学院哈尔滨150030 

基　　金："十一五"国家科技支撑计划(2006BAD04A08)资助项目 

出 版 物：《中国乳品工业》 (China Dairy Industry)

年 卷 期：2009年第37卷第11期

页      码：39-42页

摘      要：利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术建立一种快速检测原料乳中大肠杆菌数量的方法。根据大肠杆菌的ITS保守序列设计特异性引物,应用常规PCR方法确定引物特异性,然后优化SYBR GreenⅠ的添加量和Mg2+的额外添加量,确定对原料乳中大肠杆菌的最低检测限。结果表明,引物具有很强的特异性,最终确定的SYBR GreenⅠ(20×)的添加量为0.75μL,Mg2+的额外添加量为0.875mmol/L;在不增菌的前提下,对原料乳中大肠杆菌的最低检测限为1.7×103mL-1。检测的10份样品中有四份样品的大肠杆菌数超过103mL-1,与平板菌落计数结果无显著差异。该方法特异性强,灵敏度高,操作简便快捷,整个检测过程仅需3h,具有较大的推广及应用价值。

主 题 词：大肠杆菌 原料乳 荧光定量PCR 

学科分类：0832[0832] 08[工学] 083203[083203] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-2230.2009.11.011

馆 藏 号：203295509...