抗菌肽VIP在毕赤酵母中的高效表达及鉴定

作     者：乔想金 李文新 白丽娟 胡巍 南怀燕 Xiangjin Qiao;Wenxin Li;Lijuan Bai;Wei Hu;and Huaiyan Nan

作者机构：兰州兰石能源装备工程研究院生物制造工程技术中心甘肃兰州730300 中国科学院西北生态环境研究院甘肃兰州730000 

基　　金：兰石集团研究院技术创新项目(No.G17-22)资助 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2018年第34卷第6期

页      码：1002-1011页

摘      要：基于人抗菌肽VIP(Vasoactive intestinal peptide)基因序列,按照毕赤酵母密码子偏好性设计引物;用SOE-PCR法扩增目的基因;然后将目的基因克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA上,构建VIP分泌表达菌株GS115-p PICZαA-vip。用甲醇诱导96 h收集上清,用质谱进行鉴定,结果显示分泌表达产物与人抗菌肽VIP理论值(3 326.82 Da)完全一致,表明人抗菌肽VIP成功得到分泌表达。琼脂糖凝胶扩散法实验结果显示,重组VIP对大肠杆菌Escherichia coli ATCC25922和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC25923都有很强的抗菌活性,MIC(Minimal inhibitory concentration)分别为8 mmol/L和16 mmol/L。进一步细胞毒性和溶血性实验结果显示,重组VIP对正常细胞NCM460和IPEC-J2没有毒性,其对SD大鼠红细胞不具有溶血活性。通过透射电镜观察了VIP的抗菌机制,结果显示VIP主要通过破坏细胞膜的方式抑杀细菌。本研究为人抗菌肽VIP的开发应用和大量生产奠定了基础。

主 题 词：抗菌肽 基因克隆 毕赤酵母 分泌表达 抗菌活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.170506

馆 藏 号：203296167...