Klebsiella ***-1的α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质

作     者：郭双双 兰青 何贺贺 郑芳芳 王子龙 韦宇拓 黄日波 杜丽琴 GUO Shuangshuang;LAN Qing;HE Hehe;ZHENG Fangfang;WANG Zilong;WEI Yutuo;HUANG Ribo;DU Liqin

作者机构：广西大学生命科学与技术学院广西南宁530005 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西南宁530005 

基　　金：国家自然科学基金项目(31360369) 广西科学研究与技术开发计划项目主席科技资金项目(17290-03)资助 

出 版 物：《广西科学》 (Guangxi Sciences)

年 卷 期：2018年第25卷第3期

页      码：290-298,312页

摘      要：【目的】克隆、表达克雷伯氏菌***-1菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,并研究重组酶的酶学性质。【方法】比对分析GenBank数据库中克雷伯氏菌同属的α-L-鼠李糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因的保守区。扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-rha1,并在大肠杆菌*** XL-blue进行诱导表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究目的蛋白RHA1的酶学性质。【结果】以pNPR为底物,进行重组酶酶学性质的研究。重组酶RHA1的最适pH值和最适温度分别为5.0和45℃,Km值为(0.223±0.030)mmol/L,V_(max)值为(1.272±0.121)μmol/(min·mg)。在pH值为6~10的缓冲液内酶活力仍保持在80%以上;在温度为40℃以下时,酶活较为稳定,但在温度高于40℃时酶活力迅速下降。RHA1能水解pNPR、橙皮苷和芦丁。【结论】RHA1具有良好的pH稳定性,不仅能够水解人工底物pNPR,还能够水解α-1,6键的天然底物橙皮苷和芦丁,具有一定的医疗应用价值。

主 题 词：克雷伯氏菌 α-L-鼠李糖苷酶 克隆表达 酶学性质 

学科分类：08[工学] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 

D　O　I：10.13656/j.cnki.gxkx.20180604.001

馆 藏 号：203296296...