表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

作     者：张赫 南福龙 鲁会军 解长占 张萍 张金勇 庄忻雨 田明尧 步志高 金宁一 ZHANG He1 , NAN Fu-long1,2 , LU Hui-jun1 , XIE Chang-zhan1,4 , ZHANG Ping1,4 , ZHANG Jin- yong1,4 ,ZHUANG Xin-yu1 ,TIAN ming-yao1 ,BU Zhi-gao3 ,JIN Ning-yi1

作者机构：解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林大学动物医学学院吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31272573) 吉林省自然科学基金资助项目(20130101093JC) 吉林省科技发展计划项目(20140623019TC,20160623024TC) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2018年第38卷第5期

页      码：841-845页

摘      要：应用反向遗传技术对新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）LaSota株感染性克隆PBRN—FL质粒进行操作，构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSVLV株ORF5序列，设计引物扩增0RF5片段，通过PBRN—FL质粒上P和M基因间的PmeI酶切住点插入目的片段，构建重组质粒LaSota—ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI—NP、PCI-P、PCI—L等3种辅助质粒共转染BSR—T7／5／细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）和Western blot（WB）试验鉴定。结果显示：拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确，IFA出现绿色荧光，WB试验条带大小符合预期，证明GP5蛋白有效表达。结果表明：成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5，为制备表达PRRSVGP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。

主 题 词：新城疫病毒 LaSota GP5蛋白 病毒拯救 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.05.01

馆 藏 号：203296297...