利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠

作     者：艾东旭 钟德刚 孙菲 李钰 李崇 秦佟童 高梦樵 董施施 孙兆增 李莲瑞 AI Dong-xu;ZHONG De-gang;SUN Fei;Li Yu;LI Chong;QIN Tong-tong;GAO Meng-qiao;DONG Shi-shi;SUN Zhao-zeng;LI Lian-rui

作者机构：塔里木大学生命科学学院阿拉尔市843300 山东省日照市莒县畜牧兽医局日照276529 军事医学研究院实验动物中心北京100071 塔里木大学动物科学学院阿拉尔市843300 

基　　金：军队实验动物专项[SYDW(2014)006] 

出 版 物：《实验动物与比较医学》 (Laboratory Animal and Comparative Medicine)

年 卷 期：2018年第38卷第3期

页      码：202-206页

摘      要：目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sg RNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。

主 题 词：CRISPR/Cas9 溶酶体运输调节因子(Lyst)基因 基因敲除 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.007

馆 藏 号：203296439...