牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

作     者：郎景民 布日额 孙立杰 刘娣 吴金花 锡林高娃 刘燕 史芬芳 LANG Jing-min;BU Ri-e;SUN Li-jie;LIU Di;wU Jin-hua;XILIN Gao-wa;LIU Yan;SHI Fen-fang

作者机构：内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028043 黑龙江省农业科学院黑龙江哈尔滨150086 河北征宇制药有限公司河北石家庄051431 

基　　金：内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目(NJ09100) 黑龙江省农业科学院博士后基金项目(LRB07-118) 第45批中国博士后科学研究基金(20090451027) 国家自然科学基金(31060352) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2011年第33卷第1期

页      码：37-40页

摘      要：为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定。根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度。

主 题 词：无乳链球菌 sip基因 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2011.01.09

馆 藏 号：203296651...