弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗的研制

作     者：李瑾 魏庆宽 徐秀来 傅婷霞 崔勇 肖婷 王洪法 张佃波 王用斌 黄炳成 闫歌 韩广东 LI Jin;WEI Qing-kuan;XU Xiu-lai;FU Ting-xia;CUI Yong;XIAO Ting;WANG Hong-fa;ZHANG Dian-bo;WANG Yong-bin;HUANG Bing-cheng;YAN Ge;HAN Guang-dong

作者机构：山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.022130133) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2008年第3卷第5期

页      码：374-378页

摘      要：目的研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗。应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒。测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P<0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应。结论该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值。

主 题 词：刚地弓形虫 棒状体蛋白2(ROP2) 基因重组 核酸疫苗 免疫保护作用 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-5234.2008.05.015

馆 藏 号：203296703...