敲低肝癌细胞STAT3抑制IFN1诱导的HepG2肝癌细胞增殖和迁移

作     者：李潇芳 王玉琦 闫奔 房佩佩 马超 徐宁 付晓燕 梁淑娟 LI Xiaofang;WANG Yuqi;YAN Ben;FANG Peipei;MA Chao;XU Ning;FU Xiaoyan;LIANG Shujuan

作者机构：山东省高校免疫学重点实验室潍坊医学院免疫学实验室山东潍坊261053 

基　　金：国家自然科学基金(81272319 81201262) 山东省科技攻关计划(jk47) 山东省高校科技计划(J12LK02) 教育部大学生创新创业训练计划(201510438001 201510438009 201510438014) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2018年第34卷第2期

页      码：115-122页

摘      要：目的筛选并制备信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)慢病毒,感染Hep G2肝癌细胞抑制其STAT3表达,观察对1型干扰素(IFN1)诱导的肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制。方法设计并合成4段人STAT3基因的干扰序列(STAT3 shRNA 1~STAT3 shRNA 4)以及对照序列(Ctrl shRNA),与p LKO.1-sp6-pgk-GFP连接构建慢病毒表达载体,随后与骨架质粒ps PAX2、p MD2.G共转染HEK293T细胞制备慢病毒并感染Hep G2细胞。Western blot法检测STAT3的蛋白水平,筛选有效序列。敲低STAT3水平后,CCK-8法检测Hep G2细胞的增殖,TranswellTM迁移和划痕实验检测Hep G2细胞的迁移。同时观察2000 U/m L重组人IFNα2b诱导的肝癌细胞增殖、迁移能力的变化,Western blot法检测IFN相关STAT1信号的磷酸化水平。结果筛选对STAT3敲低效果最显著的STAT3 shRNA1和STAT3 shRNA2,敲低STAT3水平后,肝癌细胞增殖和迁移降低。2000 U/m L IFNα2b对细胞的增殖抑制作用更显著,迁移细胞的数量显著下降。敲低STAT3水平后,肝癌细胞STAT1的磷酸化水平升高,在IFNα2b处理后STAT1磷酸化水平进一步升高。结论敲低肝癌细胞STAT3通过上调STAT1信号通路活化,抑制细胞的迁移、增殖,恢复IFN在肝癌细胞中的应答。

主 题 词：1型干扰素(IFN1) 信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA) STAT1 shRNA 肝癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.008526

馆 藏 号：203296717...