利用RNAi抑制牛骨髓间充质干细胞中朊蛋白基因(PRNP)的表达

作     者：宋少康 董雅娟 柏学进 王文明 刘玮 牛召姗 赵仕全 杨莉 

作者机构：青岛农业大学动物胚胎工程中心山东青岛266109 山东省黑牛繁育工程技术研究中心山东青岛266109 山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司山东淄博256306 

基　　金：国家"抗病转基因牛新品种培育"资助项目(2008ZX08007-004) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2012年第32卷第11期

页      码：1683-1688页

摘      要：利用RNAi技术,根据牛源PRNP基因cDNA设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列,分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体,并将shRNA载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC);通过Real-time PCR和Western Blotting筛选抑制效果最佳的载体;并用800mg/L G418对转染最佳载体的细胞进行药物筛选。结果显示:成功构建了3个靶向shRNA载体和1个阴性对照shRNA载体;转染后48h在荧光镜下检测各组均可观察到绿色荧光的表达;Real-time PCR和Western Blotting结果显示,3个靶向shRNA载体在不同时间段均在一定程度上下调了PRNP mRNA的表达,抑制了朊蛋白PrPC的生成,得到了1个最佳干扰载体sh3;通过药物筛选出了稳定转染的细胞单克隆。本研究获得了1个有效抑制朊蛋白基因表达的shRNA载体,并筛选出稳定转染的细胞单克隆,上述结果可为抗疯牛病体细胞核移植提供供体细胞。

主 题 词：疯牛病 PRNP 朊蛋白PrPc shRNA BMSC 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2012.11.008

馆 藏 号：203296813...