HJURP基因缺陷表达的人胚胎绒毛细胞模型的构建与鉴定

作     者：薛慧琴 高庭 朱镭 孙夏瑜 卢洪涌 张玉萍 周岩 燕美琴 祁春茹 

作者机构：山西省儿童医院遗传室山西省妇幼保健院太原030013 

基　　金：山西省卫计委青年基金项目(编号:201201012) 

出 版 物：《中国优生与遗传杂志》 (Chinese Journal of Birth Health & Heredity)

年 卷 期：2015年第23卷第11期

页      码：27-31页

摘      要：目的构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛细胞上鉴定其沉默效率,进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型。方法针对目的基因HJURP的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点,将其合成短发夹RNA(sh RNA)并退火形成双链RNA,克隆至慢病毒载体中形成sh RNA表达载体,通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体。将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其干扰人胚胎绒毛细胞,采用Western blotting和real-Time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对重组载体p HBLVU6-Zs Green-Puro进行测序鉴定,证实插入的sh RNA序列无碱基变异。重组慢病毒载体经293T细胞包装后,病毒滴度为108PFU/ml。RNA干扰人胚胎绒毛细胞HJURP基因后,可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降,HJURP m RNA水平明显下降,其中sh RNA1干扰效率大于70%。结论成功构建了HJURP基因的sh RNA慢病毒表达载体,该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因,为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响,探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型。

主 题 词：人类胚胎绒毛细胞 HJURP RNA干扰 慢病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 100211[100211] 071007[071007] 10[医学] 

D　O　I：10.13404/j.cnki.cjbhh.2015.11.010

馆 藏 号：203296946...