小鼠LSK及DN原代细胞中基因编辑方法的建立

作     者：王跃强 Avinash Bhandoola WANG Yue-qiang;Avinash Bhandoolal

作者机构：Laboratory of Genome IntegrityCenter for Cancer ResearchNational Cancer InstituteMD 20892-4254USA 深圳国家基因库合成与编辑平台深圳518083 

基　　金：美国国立卫生研究院(NIH)(AI059621 AI098428) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2018年第34卷第5期

页      码：64-70页

摘      要：小鼠(Mus musculus)免疫系统包含种类众多、功能各异的细胞群体。为了研究小鼠免疫系统的发育机制,需要建立高效的遗传操作技术方法。首先选择Cas9敲入小鼠的DN细胞(CD4-~CD8^-double negative thymocytes)为研究对象,针对GFP和CD4表面抗原基因设计构建了sgRNA(single guide RNA),使用小鼠逆转录病毒(Murine stem cell virus,MSCV)为载体实施了基因编辑。通过流式细胞仪分析,检测到GFP和CD4被成功敲除。在此基础上,选取Cas9敲入小鼠的LSK细胞(Lin^-Sca1^+Kit^+)为研究对象,使用同样的方法针对Tcf7基因设计构建了sgRNA并实施基因编辑。基因编辑后,LSK细胞不能正常分化为下游T细胞,但其分化为髓系细胞能力不受影响。这些结果表明,针对小鼠LSK和DN原代细胞实施的基因编辑取得成功。

主 题 词：小鼠 免疫 干细胞 基因编辑 CRISPR/Cas9 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0903

馆 藏 号：203301402...