多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

作     者：石晓路 扈庆华 张佳峰 李庆阁 王冰 林一曼 庄志雄 刘小立 张顺祥 SHI Xiao-lu;HU Qing-hua;ZHANG Jia-feng;LI Qing-ge;WANG Bing;LIN Yi-man;ZHUANG Zhi-xiong;LIU Xiao-li;ZHANG Shun-xiang

作者机构：深圳市疾病预防控制中心518020 厦门大学生命科学学院 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30300281) 广东省卫生厅资助项目(A2003709) 深圳市科技局资助项目(200404139) 

出 版 物：《中华流行病学杂志》 (Chinese Journal of Epidemiology)

年 卷 期：2006年第27卷第12期

页      码：1053-1056页

摘      要：目的建立改良分子信标-多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法,应用于食源性致病菌的快速诊断。方法根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因,分别设计一对引物和改良分子信标探针,用同色荧光标记,用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,加入沙门菌检测体系中,建立三重实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果改良分子信标-多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69-93 fg／μl,菌液灵敏度为32-64 CFU／ml或1-2 CFU／PCR反应体系,无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测,569份沙门菌实时PCR阳性,其中551份沙门菌培养阳性;42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2 h至1 d。结论改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断,伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

主 题 词：沙门菌 志贺菌 多重实时聚合酶链反应 同步检测 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:0254-6450.2006.12.012

馆 藏 号：203301404...