纤连蛋白的分段表达及与乙肝表面抗原相互作用研究

作     者：王峰 杨静 王国栋 丁晓然 张敏丽 王升启 WANG Feng;YANG Jing;WANG Guo-Dong;DING Xiao-Ran;ZHANG Min-Li;WANG Sheng-Qi

作者机构：西北农林科技大学生命科学学院杨凌712100 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 

基　　金：国家自然科学基金重点项目(30530650) 国家"973"计划基金资助项目(2005CB522902) 

出 版 物：《军事医学科学院院刊》 (Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences)

年 卷 期：2007年第31卷第1期

页      码：24-27,38页

摘      要：目的:克隆纤连蛋白(fibronectin)各功能区域基因,在大肠杆菌中表达以筛选与HBsAg相互作用的区域。方法:将纤连蛋白分成7个片段,设计引物,利用RT-PCR从HepG2.2.15中扩增出相应的PCR产物,连接到表达载体pGEX4T-1中,用IPTG诱导目的蛋白在***中表达,通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定。融合蛋白纯化后制备蛋白芯片,与HBsAg杂交,筛选纤连蛋白中与HBsAg相互作用的区域。结果:经RT-PCR从HepG2.2.15中扩增到各结构域片段的cDNA,序列分析均正确;SDS-PAGE分析表明,各结构域片段的可溶性表达产物均占细菌可溶性蛋白的10%以上;Western印迹分析提示,诱导表达产物可与GST单抗发生特异性反应。经制备蛋白芯片并杂交,发现片段FN1、FN2信号最强。结论:成功地表达了纤连蛋白各片段,蛋白芯片杂交结果显示纤连蛋白可能是通过Ⅱ型肝素结合区及其羰基端(c端)与HBsAg相互作用。

主 题 词：纤连蛋白 乙肝表面抗原 基因表达 纯化 蛋白芯片 聚合酶链反应 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2007.01.006

馆 藏 号：203301455...