猪盖他病毒衣壳蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

作     者：姜焱 何丹妮 张小敏 周斌 陈溥言 

作者机构：江苏出入境检验检疫局南京210001 南京农业大学动物医学院南京210095 

基　　金：国家质检总局科技计划项目(2009IK012) 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2013年第29卷第4期

页      码：371-375页

摘      要：原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体。设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT-Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pColdⅠ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白;蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体。实验表明:经终浓度0.1mmol/L IPTG 15℃诱导24h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3kD。Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带。猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白。

主 题 词：猪盖他病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090601[090601] 1002[医学-临床医学类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002403

馆 藏 号：203304147...