猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立

作     者：拜廷阳 赵德明 吴志明 闫若潜 刘淑敏 赵明军 刘梅芬 BAI Ting-yang;ZHAO De-ming;WU Zhi-ming;YAN Ruo-qian;LIU Shu-min;ZHAO Ming-jun;LIU Mei-fen

作者机构：中国农业大学动物医学院北京100094 周口市畜禽改良站周口466000 河南省动物疫病预防控制中心郑州450008 郑州市中心医院消毒供应中心郑州450007 

基　　金：河南省科技创新人才计划项目(No.2011-1)资助~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2014年第30卷第2期

页      码：169-174页

摘      要：目的建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。方法根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQPCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测。结果成功建立了PCMV的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%。猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠。结论成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义。

主 题 词：猪巨细胞病毒 实时荧光定量PCR TaqMan荧光探针 检测 应用 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.013

馆 藏 号：203304431...