巢氏PCR扩增低拷贝HBV全基因组方法的建立及应用

作     者：张孟 李倩 周华君 孙长贵 成军 戴玉柱 ZHANG Meng;LI Qian;ZHOU Hua-jun;SUN Chang-gui;CHENG Jun;DAI Yu-zhu

作者机构：中国人民解放军第一一七医院财经中心杭州310013 中国人民解放军第一一七医院检验科杭州310013 

基　　金：浙江省自然科学基金项目(LY15H200001) 

出 版 物：《现代检验医学杂志》 (Journal of Modern Laboratory Medicine)

年 卷 期：2018年第33卷第3期

页      码：44-49页

摘      要：目的建立一种用于低拷贝乙型肝炎病毒(HBV)不同基因型全基因组扩增的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法及应用评价。方法通过设计和改良一组对HBV各基因型(A,B,C,D,E,F,G)DNA均具有较高扩增效率的通用巢式简并引物,采用两步法分六段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增低拷贝HBV基因组,比较不同反应条件对于PCR扩增产物的影响(退火温度,引物浓度),建立一种适合于低拷贝HBV全基因组扩增的方法;同时采用该方法对57份低浓度HBsAg乙肝感染者(HBsAg<10IU/ml)的全基因组进行扩增、测序、拼接并进行评价。结果该方法的灵敏度可达25IU/ml,重复性好,对57份低浓度HBsAg乙肝感染者进行扩增,其中全基因扩增49例(86.0%),各片段(Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb,Ⅲ,Ⅳ)扩增分别为:53例(93.0%),52例(91.2%),54例(94.7%),54例(94.7%),55例(96.5%)和49例(86.0%),说明该方法适用于慢性低浓度HBsAg乙肝感染者HBV DNA全基因扩增。结论该文为慢性低浓度HBsAg乙肝感染者的全基因系列分析提供了高灵敏度、高特异度的方法,可在低浓度HBsAg感染者流行病学调查中发挥重要作用,同时为巢氏PCR扩增反应体系的优化提供了参考。

主 题 词：乙型肝炎病毒 低拷贝 全基因 巢式聚合酶链式反应 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7414.2018.03.013

馆 藏 号：203304623...