利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

作     者：刘璐 郭杰 朱可蒙 王宁 辛九庆 刘玉芬 刘恒贵 LIU Lu;GUO Jie;ZHU Ke-meng;WANG Ning;XIN Jiu-qing;LIU Yu-fen[1.];LIU Heng-gui

作者机构：哈尔滨师范大学生命科学与技术学院哈尔滨150025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体团队哈尔滨150069 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302016005 1610302017014) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2018年第49卷第7期

页      码：1492-1499页

摘      要：构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位。设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNaseⅠ将p97突变基因随机消化成长度100~250bp的片段,回收产物经3′端加A处理后与用XcmⅠ酶切的酵母表达载体pCT-XcmⅠ连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库。利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位。结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×106克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽。从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应。P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义。

主 题 词：猪肺炎支原体 P97黏附蛋白 酵母展示文库 B细胞表位 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.019

馆 藏 号：203304650...