相对定量检测HIV/AIDS病人PBMCs中TIGIT mRNA表达水平的方法建立

作     者：陈琛 戚应杰 岳莉 石玉如 王云 王勇 徐前明 刘亚 赵长城 CHEN Chen;QI Yingjie;YUE Li;SHI Yuru;WANG Yun;WANG Yong;XU Qianming;LIU Ya;ZHAO Changcheng

作者机构：安徽省立医院感染病院合肥230022 安徽农业大学动物科技学院合肥230036 

基　　金：合肥市卫生计生委2016年应用医学研究(重点)项目(hwk2016zd011)资助 

出 版 物：《中国艾滋病性病》 (Chinese Journal of Aids & STD)

年 卷 期：2018年第24卷第7期

页      码：646-649页

摘      要：目的建立检测人外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）中T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域（TIGIT）信使核糖核酸（mRNA）表达水平的相对定量方法,并探讨TIGIT在艾滋病病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）病人（简称HIV/AIDS病人）临床监测中的意义。方法设计基因TIGIT引物3对,并利用超声波-煮沸法提取人PBMCs总RNA,选用管家基因GAPDH作为内参,然后用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行反转录及扩增TIGIT基因。利用软件测定电泳条带的灰度值（IOD）,计算TIGIT mRNA的相对表达量。结果超声波-煮沸法提取的RNA纯度（A260/A280=1.71±0.056）优于超声波法（A260/A280=1.51±0.023）和煮沸法（A260/A280=1.375±0.078）;筛选出扩增条带清晰且单一的TIGIT引物;相对定量结果表明,TIGIT mRNA在HIV/AIDS病人中的相对表达量均数（0.520 4±0.067）显著低于健康人群（1.383±0.093）,差异有统计学意义（t=7.206,P=0.0167）。结论所建立的相对定量RT-PCR检测方法具有成本低、简单易行的优点,可应用于检测HIV/AIDS病人外周血中TIGIT mRNA的表达差异。

主 题 词：艾滋病 外周血单个核淋巴细胞 T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域 相对定量 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13419/j.cnki.aids.2018.06.02

馆 藏 号：203304902...