DNA型EGS抑制HCMV UL97基因的表达及病毒复制

作     者：刘琳 伍婧茹 张文军 LIU Lin;WU Jingru;ZHANG Wenjun

作者机构：广东药科大学基础学院广东广州510006 

基　　金：中国博士后科研基金(2013M540601) 

出 版 物：《广东药科大学学报》 (Journal of Guangdong Pharmaceutical University)

年 卷 期：2018年第34卷第3期

页      码：365-370页

摘      要：目的研究DNA型外部引导序列对人巨细胞病毒(HCMV)UL97基因的靶向抑制作用及抗病毒作用。方法借助计算机软件(RNAStructure4.5)模拟HCMV UL97 RNA的结构,选择二级结构相对简单且具备核糖核酸酶P(RNase P)底物一级结构序列特征的位点作为候选切割靶位,针对不同靶位设计并合成的DNA型EGS。将各EGS分别与体外转录的HCMV UL97 RNA及纯化的人RNase P体外混合,初步筛选具备靶向引导切割活性的EGS。进一步将体外有效的EGS转入HCMV感染的人胚肺成纤维细胞(HELF),通过Western与Northern印迹法检测EGS在宿主细胞内对靶基因表达的影响。此外,通过空斑试验测定病毒的生长曲线,测定EGS对病毒复制的影响。结果本文设计并合成了针对HCMV UL97基因6个不同靶位的DNA型EGS(EGS_(168)、EGS_(212)、EGS_(313)、EGS_(663)、EGS_(1580)和EGS_(1664))。体外切割试验证实,EGS_(212)、EGS_(313)、EGS_(663)和EGS_(1580)具有明显的靶向引导切割作用。在HCMV感染的宿主细胞中,EGS_(212)和EGS_(1580)均能够沉默病毒UL97基因的表达,并显著抑制病毒的复制,分别使病毒滴度降低高达约300倍和600倍。结论本研究成功获得两种具有抗HCMV潜力的DNA型EGS,为进一步研发新型抗HCMV核酸类药物奠定了基础。

主 题 词：DNA型EGS 核糖核酸酶P UL97基因 人巨细胞病毒 抗病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16809/j.cnki.2096-3653.2018050201

馆 藏 号：203305016...