利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除H9c2细胞Tudor-SN基因对细胞周期的阻滞及增殖的抑制

作     者：甘世虎 崔晓腾 马锦征 房丽娇 刘明霞 任媛媛 曹晓娜 杨洁 苏超 GAN Shi-Hu;CUI Xiao-Teng;MA Jin-Zheng;FANG Li-Jiao;LIU Ming-Xia;REN Yuan-Yuan;CAO Xiao-Na;YANG Jie;SU Chao

作者机构：天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系天津300070 

基　　金：国家杰出青年基金资助项目(No.31125012) 教育部"创新团队发展计划"(No.IRT13085) 国家自然科学基金资助项目(No.31170830 No.31370749 No.31571380 No.31701182) 天津市应用基础与前沿技术研究计划青年基金项目(No.15JCQNJC09900) 天津医科大学青年基金项目(No.2015KYZQ03)~~ 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2018年第34卷第7期

页      码：754-759页

摘      要：基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,实现对大鼠心肌H9c2细胞Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)基因的敲除,并观察其对H9c2细胞周期及增殖的影响。选择PX462质粒为载体,利用软件设计能特异性识别H9c2细胞Tudor-SN基因第2个外显子的上下游sgRNA(single-guided RNA),构建1对重组质粒。随后,将这对质粒共同转入H9c2细胞中,再挑选阳性单克隆细胞进行培养。Western印迹鉴定其敲除效果,并用敲除成功的细胞株通过流式细胞术及CCK-8(cell counting kit 8)实验进行细胞周期和增殖的检测。Western印迹结果显示,在阳性细胞中,Tudor-SN蛋白不表达,成功实现了对Tudor-SN基因的敲除。流式结果显示,Tudor-SN基因敲除(KO)细胞发生了G1期阻滞。G1期细胞占比由H9c2野生型(WT)细胞的54.28%±0.21%升高到KO细胞的61.96%±0.40%(*P<0.05)。CCK-8实验结果显示,KO细胞的增殖速率减慢。生长第6天的A值由WT细胞的2.82±0.03降低到KO细胞1.85±0.19(*P<0.05)。本实验成功构建了H9c2细胞Tudor-SN基因敲除细胞株,并检测到Tudor-SN基因敲除对细胞周期的阻滞及增殖的抑制,为研究Tudor-SN基因对心肌细胞功能的调控提供了便利的工具及研究的基础。

主 题 词：CRISPR-Cas9基因编辑技术 基因敲除 H9c2细胞 Tudor-SN基因 细胞周期阻滞与增殖 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13865/j.cnki.cjbmb.2018.07.10

馆 藏 号：203305068...