PCR检测细粒棘球蚴及DIG标记DNA杂交诊断技术的建立

作     者：冯笑梅 韩晓芳 曹银芳 王文灏 

作者机构：内蒙古自治区医院检验科内蒙古呼和浩特010017 

基　　金：内蒙古科委攻关项目 (960 1 2 4 ) 

出 版 物：《内蒙古医学杂志》 (Inner Mongolia Medical Journal)

年 卷 期：2002年第34卷第3期

页      码：189-191页

摘      要：目的 :该项研究旨在探讨聚合酶链反应 (PCR)技术在细粒棘球蚴检测和诊断中的应用 ,同时建立Digoxinum(DIG)标记DNA杂交诊断技术。方法 :根据细粒棘球蚴基因片断克隆与序列分析 ,设计了一对特异性引物 ,P15′—GGAATGGAGAGAAGTTAC— 3′,P2 5′—GCAACCTCCGGAACTTGC— 3′。以棘球蚴的囊液、子囊及原头蚴为模板 ,经PCR扩增获得 471bp特异性区带。将扩增产物纯化后 ,用DIG标记DNA ,制备成功特异性核酸探针并用于细粒棘球蚴检测。结果 :经对大肠杆菌、痢疾杆菌、结核分枝杆菌、猪囊尾蚴、健康人白细胞进行PCR扩增和DIG标记DNA探针斑点杂交 ,只有细粒棘球蚴出现单一 471bp特异性区带。PCR的灵敏性为可检出单个原头蚴及 1 0 0— 1 0fg水平的DNA ,而斑点杂交的特异性为 2 5 0 0fg。异源性DNA即使提高点膜量 ,亦不呈现阳性反应。结论 :配以DIG标记的PCR技术在细粒棘球蚴的检测中具有特异、敏感、快速、准确的特点。

主 题 词：DIG标记 聚合酶链反应 细粒棘球蚴 核酸杂交探针 包虫病 PCR 诊断 棘球蚴病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-0951.2002.03.001

馆 藏 号：203310760...