恒河猴白细胞介素-4基因的合成、原核表达及纯化

作     者：陈丹 刘娟 黄健 刘新颖 王冉 史洪娜 王维龙 沈林 李鼎锋 CHEN Dan;LIU Juan;HUANG Jian;LIU Xin-ying;WANG Ran;SHI Hong-na;WANG Wei-long;Shen Lin;Li Ding-feng

作者机构：北京雷默生物科技有限公司北京100176 昆明医学院第二附属医院药剂科昆明650101 

基　　金："重大新药创制"科技重大专项"十一五"计划(2009ZX09103-741) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2011年第24卷第9期

页      码：1046-1049,1053页

摘      要：目的人工合成恒河猴白细胞介素-4(Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达。通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定。结果双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上;Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合。结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础。

主 题 词：恒河猴 白细胞介素-4 基因合成 原核细胞 基因表达 纯化 

学科分类：071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 0817[工学-轻工类] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2011.09.55.chend.008

馆 藏 号：203311164...