犬瘟热病毒、犬细小病毒二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：赵雪丽 刘毅 班付国 闫若潜 王华俊 王淑娟 马震原 王东方 ZHAO Xueli1 , LIU Yi2 , BAN Fuguo1 , YAN Ruoqian1 , WANG Huajun1 , WANG Shujuan1 , MA Zhenyuan1 , WANG Dongfang1

作者机构：河南省动物疫病预防控制中心郑州450008 中国动物疫病预防控制中心北京100125 

基　　金：河南省科技创新人才计划项目(174200510003) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第45卷第8期

页      码：2086-2094页

摘      要：为建立一种特异、高通量检测犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,本研究选取高度保守且具有型特异性的CDV H基因和CPVVP2基因序列,设计CDV和CPV特异性引物对及TaqMan MGB探针;经反应条件优化,建立了检测CDV和CPV的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,该方法检测CDV、CPV的标准曲线线性相关系数(R^2)分别为0.997和0.993,最低检出限均为10拷贝/μL,具有较高的灵敏性;对犬副流感病毒等4种病原对照和阴性对照均未出现扩增,特异性良好;CDV、CPV标准品批间试验结果显示,该方法具有很好的重复性;对48份临床疑似CDV或CPV感染样品检测结果显示,14份为CDV阳性,19份为CPV阳性,4份为CDV/CPV双阳性,与CDV H基因、CPVVP2基因测序结果符合率为100%。本研究建立的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、高通量和可准确定量等优点,可用于临床CDV/CPV病毒感染各个时期的快速鉴别检测。

主 题 词：犬瘟热病毒(CDV) H基因 犬细小病毒(CPV) VP2基因 二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2018.08.006

馆 藏 号：203311253...