miR-20a海绵载体构建及在白血病细胞株Jurkat中的表达

作     者：吴顺泉 徐珍珍 林君 战榕 WU Shun-Quan;XU Zhen-Zhen;LIN Jun;ZHAN Rong

作者机构：福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院 

基　　金：福建医科大学苗圃基金资助(编号2010MP035) 福建省血液病学重点实验室经费资助(编号2009J1004) 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2012年第20卷第5期

页      码：1056-1062页

摘      要：本研究构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立Jurkat-S稳定细胞株,为进一步研究的miR-20a功能及应用干扰技术治疗奠定基础。设计、合成1对含有2个重复针对miR-20a成熟序列第9-12碱基错配的序列,并带有酶切位点,退火后连接到pCDNA3.0-L表达载体上;载体双酶切后再与退火产物连接,重复4次后进行酶切及荧光素酶活性鉴定;亚克隆到慢病毒表达载体,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染Jurkat细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Western blot技术分别检测Jurkat-S稳定细胞中P21及E2F1 mRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较。结果表明,成功构建了针对miR-20a基因的海绵载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立了稳定转染的Jurkat-S细胞株。有效干扰验证显示,miR-20a海绵能明显上调P21及E2F1的mRNA及蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立稳定干扰miR-20a表达的Jurkat-S细胞株。

主 题 词：miR-20a miRNA海绵 Jurkat细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203311689...