新型酰基转移酶AT-EF080951的重组表达及底物结合分析

作     者：焦豫良 王梁华 董晓毅 宗英 高云 任娜 郭爱芸 张兴群 焦炳华 Jiao Yu-liang;Wang Liang-hua;Dong Xiao-yi;Zong Ying;Gao Yun;Ren Na;Guo Ai-yun;Zhang Xing-qun;Jiao Bing-hua

作者机构：第二军医大学基础医学部上海200433 

基　　金：国家自然科学基金项目30670043 863计划海洋技术领域专题项目2006AA09Z434资助 

出 版 物：《中国抗生素杂志》 (Chinese Journal of Antibiotics)

年 卷 期：2008年第33卷第3期

页      码：140-144页

摘      要：目的研究新型聚酮合酶(PKS)基因簇EF568935(GenBank登录号)中酰基转移酶(AT)EF080951(GenBank登录号)底物特异性,为PKS的功能研究及组合生物合成研究提供新组件。方法从酰基转移酶AT-EF080951结构域两端的连接肽区设计引物,通过PCR克隆其结构域基因at-EF080951;连接入原核表达载体pMAL-c2X,与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达;直链淀粉树脂柱亲和层析纯化MBP-AT-EF080951;融合蛋白用Xa因子切除MBP,得到AT-EF080951单体;以MBP、小牛血清白蛋白(BSA)为对照蛋白,用紫外分光光度法测定MBP-AT-EF080951与AT-EF080951对底物的结合能力,计算结合常数(Ka,μmol/L),分析其结合底物的特异性。结果(1)MBP-AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.0049±0.001;丙二酰辅酶A,0.0049±0.003;乙酰辅酶A,0.107±0.002;辅酶A,0.005±0.003。(2)AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.005±0.002;丙二酰辅酶A,0.0041±0.002;乙酰辅酶A,0.120±0.001;辅酶A,0.0042±0.003。结论MBP-AT-EF080951和AT-EF080951都特异性结合乙酰辅酶A,AT-EF080951可能是乙酰转移酶。

主 题 词：聚酮合酶 酰基转移酶 乙酰基转移酶 结合常数 组合生物合成 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13461/j.cnki.cja.004162

馆 藏 号：203312161...