以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用

作     者：郭敏 李育敏 费嘉 张洹 GUO Min;LI Yu-min;FEI Jia;ZHANG Yuan

作者机构：暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510632 

基　　金：广东省自然科学基金博士启动资助项目(No.5300488) 广东省科技计划资助项目(No.2006B35502010) 暨南大学引进优秀人才科研启动资助项目(No.51205074) 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2009年第25卷第6期

页      码：1127-1131页

摘      要：目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果:MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异(P<0.05),反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论:以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。

主 题 词：microRNA 寡核苷酸类 反义 K562细胞 细胞凋亡 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2009.06.016

馆 藏 号：203317758...