PCR方法检测河豚鱼的引物筛选及反应体系优化

作     者：陈文炳 赵晨 邵碧英 江树勋 闫诚 李寿崧 林河通 CHEN Wen-bing;ZHAO Chen;SHAO Bi-ying;JIANG Shu-xun;YAN Cheng;LI Shou-song;LIN He-tong

作者机构：福建出入境检验检疫局福建福州350001 福建农林大学食品科学学院福建福州350002 

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科技项目(2008IK175) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2010年第31卷第20期

页      码：376-381页

摘      要：根据Genbank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier5.00版设计了7对引物,经过PCR筛选,确定可以在所有8个供试河豚鱼样品中检出目的DNA片段的引物HT-1,用于建立河豚鱼的PCR检测方法。对该PCR方法中6个因素包括退火温度、Mg2+终浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTPs终浓度、引物终浓度和模板DNA用量进行优化,确定优化的PCR扩增体系:10×PCR缓冲液2μL,MgCl2终浓度1.5mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U,dNTPs终浓度300μmol/L,引物终浓度0.2μmol/L,DNA模板400ng,加纯水至总体积20μL。扩增程序定为94℃预变性5min,94℃变性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环,72℃延伸5min。据此建立河豚鱼成分PCR检测方法,并通过河豚鱼与非河豚鱼的PCR检测结果比较,验证了该方法的河豚鱼特异性。研究结果还表明,该方法的检出限为0.1%,含量为0.1%的河豚鱼样品PCR检出率至少在97.5%以上。

主 题 词：河豚鱼 引物筛选 PCR检测 优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0908[0908] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

馆 藏 号：203318318...