靶向ADAM17基因RNA干扰慢病毒载体的构建及慢病毒包装

作     者：李亚清 严建平 许武林 王宏 任卓超 陈瑜 LI Ya-qing;YAN Jian-ping;XU Wu-lin;WANG Hong;REN Zhuo-chao;CHEN Yu

作者机构：浙江省人民医院呼吸内科 

基　　金：国家自然科学基金(81000016) 浙江省医药卫生科学研究基金(2008B007) 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2012年第24卷第5期

页      码：389-393,399页

摘      要：目的构建靶向ADAM17基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体及包装慢病毒。方法根据人ADAM17mRNA序列设计4个靶序列,合成4对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上5对寡核苷酸序列退火后连入pLVTHM质粒,经酶切和测序鉴定。将重组慢病毒质粒转染至A549细胞,以Real-time PCR检测A549细胞中ADAM17 mRNA表达。将干扰效果最佳的质粒载体和包装质粒共转染至293T细胞,包装产生病毒颗粒。以流式细胞术检测重组慢病毒的滴度。结果酶切和测序证实干扰靶序列已被准确克隆到pLVTHM质粒载体。pLVTHM-ADAM17-siRNA1-4均可显著抑制A549细胞ADAM17 mRNA的表达,其中pLVTHM-ADAM17-siRNA4的抑制效果最佳。LV-ADAM17-siRNA4重组慢病毒的滴度为2.16×108TU/ml。结论成功构建了靶向人ADAM17基因RNAi慢病毒载体及包装了重组慢病毒。

主 题 词：解整合素-金属蛋白酶17 RNA干扰 慢病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13381/j.cnki.cjm.2012.05.011

馆 藏 号：203319112...