肠出血性大肠杆菌(O157:H7)的特异性荧光探针检测方法的建立

作     者：姜君 王鹏志 刘利成 吴伟立 陈唯军 JIANG Jun;WANG Peng-zhi;LIU Li-cheng;WU Wei-li;CHEN Wei-jun

作者机构：中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室北京100029 北京华大吉比爱生物技术有限公司北京101300 北京微生物流行病研究所国家病原生物安全重点实验室北京100071 

基　　金："十一五"国家科技支撑计划项目(2008BAK41B03) 传染病专项(2008ZX10004-103) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2012年第12卷第12期

页      码：2201-2204页

摘      要：目的:建立一种real-time PCR,快速准确检测肠出血性大肠杆菌O157:H7。方法:以肠出血性大肠杆菌0157:H7 rfbE为待检靶基因,设计一对引物和一条Taqman探针,探针5 端用FAM基团标记,3 端用TAMRA标记。通过重组质粒的构建,建立并优化了大肠杆菌0157:H7的荧光定量PCR检测方法。结果:在人工污染样本无需富集的情况下,检测的最低DNA浓度是10拷贝/反应(3CFU/mL);特异性检测实验中,0157菌株检测结果均为rfbE阳性,而非0157:H7菌株检测结果均为阴性;重复性实验中,批内、批间变异系数均小于3%。结论:实验结果显示此荧光定量PCR方法特异性、灵敏度高,重复性好,可对分离的可疑大肠杆菌0157:H7菌株进行快速鉴定。

主 题 词：大肠杆菌0157:H7 荧光定量PCR(real-timePCR) Taqman探针 rfbE 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2012.12.022

馆 藏 号：203319127...