串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达

作     者：卢美红 李海泉 汪桂华 王敬春 丁伟峰 王惠民 LU Mei-hong;LI Hai-quan;WANG Gui-hua;WANG Jing-chun;DING Wei-feng;WANG Hui-min

作者机构：南通大学附属医院检验科226001 南通大学检验医学研究所226007 

基　　金：江苏省医学重点学科项目(XK200723) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2012年第32卷第7期

页      码：629-633页

摘      要：目的检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体（APRIL）基因的影响。方法设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段（sh644、shl451、shl938、sh2231），分别将其连接至pGenesil-1．1质粒表达载体，形成pGsh644、pGsh1451、pGshl938、pGsh2231单一表达载体，同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体。阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480。实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测SW480细胞中APRILmRNA和蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定，构建的串联siRNA质粒载体符合要求。几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达，APRILmRNA的抑制率分别是pGsh644（56．2％）、pGshl451（49．5％）、pGshl938（50．9％）、pGsh2231（49．2％）、pG4（79．3％）。蛋白质表达抑制率分别为pGsh644（56．9％）、pGshl451（48．7％）、pGshl938（50．1％）、pGsh2231（46．4％）、pG4（87．5％）（P〈0．05）。其中以pG4抑制效应最强。结论与传统单一的siRNA表达载体相比，串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达，为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础。

主 题 词：RNA干扰 串联siRNA 增殖诱导配体 结直肠癌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.07.013

馆 藏 号：203319279...