邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达

作     者：马忠华 罗如新 夏怡丰 王文东 陈文峻 蒯本科 Ma Zhonghua;Luo Ruxin;Xia Yifeng;Wang Wendong;Chen Wenjun;Kuai Benke

作者机构：复旦大学生命科学学院生物化学系上海200433 复旦大学环境科学与工程系上海200433 

基　　金：国家自然科学基金资助项目!( 3 9770 4 78)&& 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2000年第40卷第6期

页      码：579-585页

摘      要：根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 80 1bp ,有一个阅读框 ,编码 2 55个氨基酸 ,与增氧产碱菌 (Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比 ,在 693位相差一个碱基 (C→A) ,导致编码产物在 2 2 8位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到 pBluescrip tIIKS质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pBt1 2G ,在大肠杆菌JM1 0 9中可表达邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶 (C1 2 0 )的活性 ;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到 pET 30a质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pET30A ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3) plysS中可表达目的蛋白。C1 2 0是芳香族化合物降解过程中的关键酶 ,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因 ,利用草坪草降解环境中芳香族污染物 ,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG ,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C1 2 0的活性。

主 题 词：邻单胞菌 (tfd C) PCR 克隆 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2000.06.003

馆 藏 号：203319485...