C2株蓝氏贾第鞭毛虫TCTP基因的克隆、表达和序列分析（英文）

作     者：王沂 余源 田喜凤 李冀 楮晗 王洋 WANG Yi;YU Yuan;TIAN Xi-feng;LI Ji;CHU Han;WANG Yang

作者机构：河北联合大学附属医院检验科唐山063000 河北联合大学生命科学学院唐山063000 

基　　金：Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30970313) the Hebei Province Science Foundation for Youths(No.C2012401039) 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2015年第31卷第8期

页      码：717-723页

摘      要：目的克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)编码区,对其进行生物信息学分析和原核表达。方法根据WB株贾第虫TCTP编码区序列设计引物,以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得TCTP编码区片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化*** Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物,采用Ni-NTA经亲和层析纯化重组蛋白。同时根据测序结果分析C2株贾第虫TCTP蛋白结构特征和进化关系。结果克隆了包含酶切位点全长470bp的C2株贾第虫TCTP编码区,构建了原核表达载体pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中表达、纯化得到了相对分子量约18.5kDa的融合蛋白,与预期相符;测序结果显示C2株贾第虫TCTP序列与WB株相同,生物信息学分析显示贾第虫TCTP蛋白虽然序列长度较其它物种更短但与裂殖酵母TCTP空间结构相似,均由4个β折叠和3个主要的α螺旋组成,位于序列中部的不规则环状结构更小,仅9个氨基酸残基组成,在进化上与其它真核生物亲缘关系较远。结论成功克隆表达了贾第虫TCTP,为TCTP功能及贾第虫致病机制的研究提供了实验依据。

主 题 词：蓝氏贾第鞭毛虫 翻译调控肿瘤蛋白 原核表达 序列分析 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.08.007

馆 藏 号：203320613...