NDY1 shRNA真核表达质粒构建及其在卵巢癌A2780细胞中的稳定表达

作     者：卢芳芳 况燕 徐朝欢 王旗 李美仪 LuFangfang;KuangYan;XuChaohuan;WangQi;LiMeiyi

作者机构：广西医科大学第一附属医院妇产科南宁530021 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81360389) 广西自然科学基金资助项目(2012GXNSFAA053086) 广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题资助项目(Z2013026) 2013年广西研究生教育创新计划资助项目(YCSZ2014101) 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2016年第45卷第8期

页      码：1012-1015页

摘      要：目的构建NDY1shRNA真核表达载体,并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据GenBank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列,设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA(shRNA)序列,插入表达载体获得重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后,脂质体介导转染A2780细胞,经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞,采用实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确,转染shNDY1后,A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降(72.89±4.83)%及(55.85±4.84)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pGPU6/GFP/Neo-shNDY1真核表达质粒,并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞,为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。

主 题 词：卵巢肿瘤 NDY1 质粒构建 A2780细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2016.08.002

馆 藏 号：203320828...