科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法的建立

作     者：师永霞 戴俊 黎东红 袁帅 孙芳芳 郑夔 黄吉城 SHI Yong-xia;DAI Jun;LI Dong-hong;YUAN Shuai;SUN Fang-fang;ZHENG Kui;HUANG Ji-cheng

作者机构：广东检验检疫技术中心广东广州510700 

基　　金：广东省科技计划项目(2015A020213007) 

出 版 物：《中国国境卫生检疫杂志》 (Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine)

年 卷 期：2018年第41卷第4期

页      码：233-236页

摘      要：目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的引物和探针组合、用量,以及Mg^(2+)用量,建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查。结果经筛选,引物Ebv-C-3F/Ebv-C-3R和探针Ebv-C-3P对10~2~10~5拷贝/ml的阳性质粒的检出率为100.0%,是最佳的引物和探针组合。优化后的实时荧光PCR体系中引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg^(2+)终浓度为2 mmol/L。方法的灵敏度为50拷贝/ml,重复性好、特异性强,对扎伊尔型、苏丹型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照样本、马尔堡病毒阳性对照样本和广东口岸非洲发热入境人员血清样本检测均为阴性。结论建立的科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,对于境外输入性埃博拉病毒病病例的早期诊断和分型鉴别具有重要意义。

主 题 词：埃博拉病毒 实时荧光PCR 灵敏度 特异性 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.16408/j.1004-9770.2018.04.002

馆 藏 号：203321009...