敲除BMAL1基因促进HL-60细胞凋亡并抑制增殖

作     者：牟佼 戴进前 刘明莉 倪庆仁 张韵洁 温静 宋艳萍 MOU Jiao;DAI Jin-Qian;LIU Ming-Li;NI Qing-Ren;ZHANG Yun-Jie;WEN Jing;SONG Yan-Ping

作者机构：西安市中心医院血液病研究所陕西西安710003 宝鸡市第二中医医院呼吸内分泌科陕西宝鸡721300 

基　　金：陕西省自然科学基础研究计划资助项目(2015JM8479 2017JM8025) 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2018年第26卷第4期

页      码：1027-1032页

摘      要：目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除节律基因BMAL1的HL-60细胞系,探讨BMAL1分子在人急性髓系白血病中的生物学功能。方法:针对BMAL1基因设计2条sg RNA,构建含有sg RNA的PX459敲除载体;应用T7核酸内切酶I检测设计的sg RNA活性;应用打靶载体瞬时转染HL-60细胞构建BMAL1敲除细胞系,应用Western blot检测BMAL1蛋白的表达,应用流式细胞仪检测敲除细胞系的凋亡水平,应用CCK-8试剂盒检测敲除细胞系的增殖能力。结果:成功构建了针对BMAL1的PX459-sg RNA载体;并筛选得到了活性较高的打靶载体。Western blot实验在敲除细胞中未检测到BMAL1蛋白的表达。进一步实验发现,BMAL1敲除的HL-60细胞凋亡水平明显升高,细胞增殖能力明显减弱。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建了BMAL1基因敲除的HL-60细胞系,并发现BMAL1敲除可以促进HL-60细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,初步揭示了BMAL1生物节律基因在急性髓系白血病中的生物学作用。

主 题 词：CRISPR/Cas9 BMAL1 基因敲除 急性髓系白血病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7534/j.issn.1009-2137.2018.04.014

馆 藏 号：203321531...