穿透支原体铁蛋白的原核表达、纯化及生物信息学分析

作     者：何玲 雷蕾 李冉辉 曾焱华 Ling He;Lei Lei;Ranhui Li;Yanhua Zeng

作者机构：南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南衡阳421001 邵阳学院医学检验学院湖南邵阳422000 中国人民解放军第一医院呼吸内科甘肃兰州730000 

基　　金：国家自然科学基金项目(“穿透支原体Ferritin蛋白的结构和功能研究”,No.31500156) 南华大学博士启动项目(“穿透支原体Ferritin蛋白的结构和功能研究”,No.2013XQD19) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2018年第28卷第4期

页      码：350-354页

摘      要：[目的]表达纯化穿透支原体(Mycoplasma penetrans)铁蛋白(Ferritin)并利用生物信息学方法分析该蛋白的生物学特性。[方法]从NCBI网站上查到Mpe Ferritin的DNA和蛋白序列,并合成Ferritin基因,设计PCR引物,以合成基因为模板扩增Ferritin片段,将其与pET15b载体连接,将连接产物转化到大肠杆菌Top10感受态细胞。挑取阳性菌落,利用PCR和测序验证,提取质粒pET15b-Ferritin并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目的蛋白表达,并使用Ni2+亲和法纯化Ferritin蛋白。然后用生物信息学方法分析Ferritin蛋白的生物学特性。[结果]Mpe Ferritin基因全长为540 bp,编码180个氨基酸。成功构建重组质粒pET15b-Ferritin,表达并纯化得到Ferritin蛋白。Ferritin蛋白定位于细胞质,无信号肽。它的α-螺旋占71.5%,β-转角占6.7%,延伸链占5.0%,无规卷曲占16.8%。由24个同源Ferritin蛋白分子组成24聚体。[结论]通过基因工程方法纯化得到Ferritin蛋白并分析了Ferritin的生物学性质。

主 题 词：穿透支原体 Ferritin蛋白 基因克隆 蛋白表达与纯化 生物信息学 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.04.0061

馆 藏 号：203326446...