寨卡病毒E蛋白的原核表达及鉴定

作     者：张涵 曹亮 鲁会军 田明尧 孙文超 郭丹丹 汪伟 金宁一 李太元 ZHANG Han;CAO Liang;LU Hui-jun;TIAN Ming-yao;SUN Wen-chao;GUO Dan-dan;WANG Wei;JIN Ning-yi;LI Tai-yuan

作者机构：延边大学农学院预防兽医学吉林延边133002 军事医学科学院军事兽医研究所 吉林农业大学动物科学技术学院 温州大学病毒学研究所 

基　　金：国家重点研发计划项目(No.2016YFC1200901,2016YFD0500401) 吉林省科技发展计划项目(No.20160623024TC) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2018年第13卷第7期

页      码：681-684,690页

摘      要：目的应用原核表达载体pET-28a表达ZIKV主要结构蛋白E蛋白,并对反应条件进行优化,为ZIKV亚单位疫苗的研究奠定基础。方法从GenBank检索ZIKV基因组,合成E基因并进行密码子优化,以提高原核表达效率。设计引物,以合成的E基因为模板PCR扩增ZIKV E基因,用BamHI和HindIII进行双酶切后连接表达载体pET-28a,构建原核表达重组质粒pET28a-ZIKV E,转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行目的蛋白的表达,并对最适IPTG诱导浓度进行优化。结果 pET28a-ZIKV E经酶切及测序鉴定均构建正确。用重组质粒转化DE3,当加入IPTG终浓度为2mmol/L,成功表达出分子质量单位(Mr)为56×103重组ZIKV E蛋白,与理论分子质量相符合。Western blot检测重组蛋白可被His标签抗体识别。结论成功构建原核重组载体pET-28a-ZIKV E,表达的重组蛋白具有免疫反应性,为ZIKV亚单位疫苗的研制奠定了基础。

主 题 词：寨卡病毒 E蛋白 原核表达 鉴定 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.180701

馆 藏 号：203326564...