同义突变SND1慢病毒质粒的构建及回复表达

作     者：哈传博 赵然 雷静 高茹 杨洁 辛灵彪 Chuanbo Ha;Ran Zhao;Jing Lei;Ru Gao;Jie Yang;Lingbiao Xin

作者机构：天津医科大学基础医学院免疫学系天津300070 天津医科大学基础医学院医学生物化学与分子生物学系天津300070 天津医科大学基础医学院医学细胞生物学系天津300070 

基　　金：国家自然科学基金面上项目("Tudor-SN蛋白通过调控染色质的高级结构及周期阻滞促进DNA修复的机制" No.31670759) 天津市自然科学基金青年项目("SND1在人卵巢癌发生发展及化疗敏感性中的研究" No.17JCQNJC12600) 天津市高等教育委员会科技发展基金一般项目("Tudor-SN蛋白在人卵巢癌发生发展及化疗敏感性中的作用及机制的研究" No.2016YD18) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2018年第28卷第4期

页      码：329-334,391页

摘      要：[目的]构建抵抗shRNA的同义突变SND1慢病毒质粒,并在SND1敲低的卵巢癌细胞系中回复表达SND1。[方法]依据密码子的简并性,针对shRNA识别的序列(TCTCGTCTCAAACTCTATTTG)设计同义突变序列(TAGGTATAACTTTAACCTGCT)并通过重叠延伸PCR的方法将同义突变序列引入SND1的编码序列中,得到recombination SND1(rSND1)目的片段,与pLVX-IRES-Hyg载体连接。测序验证pLVX-FLAG-rSND1质粒序列。pLVX-FLAG-rSND1质粒与包装质粒共转染293T细胞,获得携带FLAG-rSND1的慢病毒毒粒。用慢病毒感染SND1敲低的卵巢癌SKOV3-sh SND1-2细胞株,经潮霉素B筛选后,用Western Blot检测FLAG和SND1的表达。[结果]抵抗shRNA的真核pLVX-FLAG-rSND1重组慢病毒质粒构建成功,可检测到FLAG及SND1的表达。[结论]成功构建了同义突变SND1的pLVX-FLAG-rSND1质粒并在卵巢癌细胞中回复表达,为继续研究SND1蛋白在卵巢癌中的功能奠定了基础。

主 题 词：SND1 质粒构建 重叠延伸PCR 同义突变 慢病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.04.0057

馆 藏 号：203326978...