His-FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

作     者：邹明祥 李军 邬国军 武文君 张宁洁 刘文恩 范学工 

作者机构：中南大学湘雅医院检验科湖南长沙410008 中南大学基础医学院微生物学系湖南长沙410078 河南中医学院第一附属医院检验科河南郑州450000 中南大学湘雅医院感染病科湖南长沙410008 

基　　金：湖南省自然科学基金资助课题(10JJ5027) 中南大学自由探索研究创新基金(2010112001166) 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2012年第24卷第10期

页      码：878-882页

摘      要：目的构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5 加入BamHI及SalI酶切位点;以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段。将目的 DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α;阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定。将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证。结果经PCR、双酶切鉴定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功;重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白;经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4 h的表达量占细胞总蛋白的27.5%。结论成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 femA基因 原核表达 融合蛋白 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13381/j.cnki.cjm.2012.10.001

馆 藏 号：203327402...