白纹伊蚊唾液腺34 ku-2基因克隆与原核表达

作     者：李方站 程金芝 王涛 牟小会 颜凤 翟慧 吴家红 LI Fang-zhan;CHENG Jin-zhi;WANG Tao;MOU Xiao-hui;YAN Feng;ZHAI Hui;WU Jia-hong

作者机构：贵阳医学院基础医学院人体寄生虫学教研室贵阳医学院现代病原生物学实验室贵州贵阳550025 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30600515,81060138) 贵州省省长基金项目(黔省专合字(2007)48号) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2015年第10卷第2期

页      码：165-169页

摘      要：目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;将该基因克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,重组质粒在大肠埃希菌BL21/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定。结果 RT-PCR扩增获得Aalb_34ku-2 2个转录本。Aalb_34ku-2_1序列长度为954bp,编码318个氨基酸,等电点为5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF为882bp,编码294个氨基酸,等电点为6.09。两者相差24个氨基酸;构建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组表达载体并转入大肠埃希菌*** BL21(DE3),IPTG诱导后得到的重组蛋白与目的蛋白分子质量(34ku)相符,经鉴定为包涵体蛋白。结论成功构建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组原核表达质粒并表达出融合蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

主 题 词：白纹伊蚊 唾液腺 34ku-2 原核表达 序列分析 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.150214

馆 藏 号：203327460...