MMP-9反义RNA真核表达载体的构建及鉴定

作     者：唐琳 陈奎生 张岚 张云汉 高冬玲 

作者机构：河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院 

基　　金：国家"十五""211"工程重点学科建设项目[教重办(2002)第2号] 河南省医学科技创新人才工程资助项目(No.2003112007) 

出 版 物：《山东医药》 (Shandong Medical Journal)

年 卷 期：2005年第45卷第16期

页      码：13-14页

摘      要：目的构建MMP-9反义RNA真核表达载体。方法提取胃癌组织总RNA,按照GenBank中检索的MMP-9基因cDNA序列,设计并合成反义MMP-9基因片段引物,进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),先将扩增产物克隆至pGEM-T载体,再将其反向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,然后对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增出的反义片段与预期长度相符。构建的MMP-9反义RNA表达质粒pcDNA3.1-MMP-9分别作PCR及双酶切(BamH和Hind)鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与反义MMP-9序列设计完全一致。结论成功构建了MMP-9反义RNA真核表达载体pcDNA3.1-MMP-9,为进一步研究MMP-9蛋白分子的生物学功能和以MMP-9为靶点的恶性肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。

主 题 词：真核表达载体 逆转录聚合酶链反应 反义RNA表达质粒 pcDNA3.1 MMP-9基因 cDNA序列 真核表达质粒 PCR扩增 BamHⅠ 生物学功能 总RNA 胃癌组织 扩增产物 基因片段 测序分析 酶切鉴定 阳性克隆 序列设计 插入片段 基因治疗 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 100401[100401] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-266X.2005.16.006

馆 藏 号：203331676...