单一引物标记LUX荧光RT-PCR鉴别BTV和EHDV

作     者：张彩虹 花群义 阮周曦 杨俊兴 曾少灵 陶虹 陈兵 曹琛福 林庆燕 周晓黎 ZHANG Cai-hong;HUA Qun-yi;RUAN Zhou-xi;YANG Jun-xing;ZENG Shao-ling;TAO Hong;CHEN Bing;CAO Chen-fu;LIN Qing-yin;ZHOU Xiao-li

作者机构：深圳出入境检验检疫局广东深圳518010 云南出入境检验检疫局云南昆明650228 

基　　金：国家863计划项目(2006AA10Z445) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第31卷第3期

页      码：6-11页

摘      要：采用在线LUXTM专业软件,根据BTV-NS3基因序列和EHDV-NS3基因序列,通过特异性单一引物序列3′末端的荧光标记,分别设计出两对BTV和EHDV的LUX荧光PCR引物,并采用BLAST软件对各引物进行匹配性和特异性分析,根据分析结果选择合适的引物合成。经过各反应条件的优化和特异性、敏感性试验,并对BTV、EHDV、VSV、PPRV、BVDV、AKV的BHK-21细胞培养物和临床样品检测,与常规RT-PCR进行对比检测,建立了能同时鉴别检测BTV和EHDV的二重LUXTM荧光PCR方法。该二重LUXTM荧光PCR的BTV和EHDV各自引物只对相应的病毒呈阳性反应,两者没有交叉反应现象,对健康牛、羊和猪基因组DNA、BKH-21细胞对照,以及其他几种相似疾病如VSV、PPRV、BVDV、AKV均呈阴性反应。该法对病毒的细胞培养液鉴别检测敏感性可达1TCID50C以上,比常规RT-PCR敏感性提高10倍以上,从样品核酸纯化到完成二重LUXTM荧光PCR反应和熔解曲线分析,仅需3h,在进出口动物检验检疫中快速鉴别BTV和EHDV具有实际应用价值。

主 题 词：LUX荧光RT-PCR 蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2010.03.002

馆 藏 号：203333361...