葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：赖呈纯 范丽华 谢鸿根 余亚白 郑铭西 谢福鑫 Lai Chengchun;Fan Lihua;Xie Honggen;Yu Yabai;Zheng Mingxi;Xie Fuxin

作者机构：福建省农业科学院农业工程技术研究所福州350003 

基　　金：福建省农业科学院博士科研启动基金项目(闽农科政245号) 福建省农业科学院院管项目(A2010-1) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2012年第28卷第2期

页      码：159-164页

摘      要：采用正交设计L9(34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平。最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng。反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存。

主 题 词：葡萄ISSR-PCR 正交设计 单因素试验 反应体系 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2012.02.010

馆 藏 号：203334331...