复合PCR扩增人mtDNA HVR方法的初探

作     者：李琳 邵金陵 段小红 李雪娟 刘振霞 

作者机构：第四军医大学口腔医院陕西西安710032 陕西师范大学生命科学学院陕西西安710062 

基　　金：国家自然科学基金项目(31070835) 陕西省社发公关课题基金项目(2011k15-06-04) 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2013年第13卷第7期

页      码：1360-1363页

摘      要：目的:建立一种高效的扩增线粒体DNA高可变区(mtDNA HVR)的方法。方法:本研究选取5例健康成人静脉血,用人血全基因组DNA试剂盒,提取全基因组DNA,设计引物,用复合PCR方式,对线粒体DNA中的高可变区进行扩增。复合扩增的方式为:用6对套叠引物分开进行两次独立的PCR,扩增mtDNA HVR。第一次扩增用3对引物,目标DNA片段基本涵盖整个线粒体DNA的高可变区,扩增后得到互不重叠的3个短片段,分别为113 bp,126 bp和131 bp。第二次复合扩增用其余的3对引物,目标片段基本重叠在第一次扩增所得的目标片段的区域内,扩增得到3个互不重叠的片段为124 bp,133 bp和93 bp。所有扩增产物经过纯化后测序。结果:复合PCR方式获得的mtDNA HVR基因序列完整,5个样本均出现特异性条带,电泳结果条带单一、清晰。结论:复合扩增PCR方法对mtDNA HVR区的扩增效率高,测序结果稳定,结合6对套叠引物,不但保证了序列的完整性,另外,两次独立的PCR也减少了PCR反应过程中错配的发生,此法也适用于保存时间较久的古代线粒体DNA短片段的研究。复合扩增PCR还展示出了潜在的高产量的特点,相对传统PCR显示了其更多的优势。

主 题 词：mtDNA HVR Multiplex-PCR 套叠引物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 071007[071007] 

D　O　I：10.13241/j.cnki.pmb.2013.07.001

馆 藏 号：203334835...