靶向大鼠海马神经干细胞STAT3慢病毒shRNA干扰载体的构建与鉴定

作     者：成翔 金国华 张新化 张蕾 陈赓 秦建兵 Cheng Xiang;Jin Guohua;Zhang Xinhua;Zhang Lei;Chen Geng;Qin Jianbing

作者机构：南通大学杏林学院南通226001 南通大学医学院人体解剖学系南通226001 

基　　金：国家自然科学基金(31271138) 江苏省高校自然科学基金项目(11KJB180008) 南通大学杏林学院自然科学基金(2012K131) 江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD) 

出 版 物：《神经解剖学杂志》 (Chinese Journal of Neuroanatomy)

年 卷 期：2014年第30卷第5期

页      码：551-556页

摘      要：目的:构建与鉴定靶向大鼠海马干细胞(neural stem cells,NSCs)信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor3,STAT3)shRNA慢病毒载体。方法:设计并合成4条靶向大鼠STAT3基因的shRNA干扰序列(shRNA1、2、3、4)及1条阴性对照序列(negative control,NC),将其分别重组于慢病毒载体,慢病毒包装后感染大鼠海马神经干细胞,荧光显微镜下通过观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达计算慢病毒感染效率;利用RT-PCR和Western Blot检测干扰后大鼠海马NSCs中STAT3的mRNA和蛋白质表达水平。结果:干扰序列测序结果正确;感染指数(multiply of index,MOI)为1∶20时感染效率最高为85.6±3.14%;感染大鼠海马NSCs 72 h后利用RT-PCR和Western Blot检测干扰效率发现shRNA1干扰效率最好,其基因水平干扰效率为81.3%±4.22%;蛋白水平干扰效率为72.3%±5.12%。结论:成功构建靶向大鼠海马干细胞STAT3慢病毒干扰载体,并通过筛选发现shRNA1能有效抑制NSCs的STAT3 mRNA和蛋白表达,为研究海马NSCs分化机制奠定了工作基础。

主 题 词：STAT3 海马 NSC shRNA 慢病毒 大鼠 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.11670/1000-7547.201405009

馆 藏 号：203335617...